广州道一 PES-5小型垂直电泳使用说明

 第一部分 组成

为更好的使用PES - 5小型垂直电泳仪器，请在使用前熟悉各组件的安装和拆卸（参见图 1、2）。

图1. 安装PES - 5小型垂直电泳槽

图2.安装PES - 5小型垂直电泳槽 制胶框和灌胶架

电泳梳的每孔最大上样体积

 外部尺寸: 16 cm (L) x 12cm (W) x18 cm (H)

预制胶兼容性:小型预制凝胶 

毛重: 2.0 kg

第二部分 制胶

1. 玻板三明治胶盒和灌胶架

注: 所有的玻板都必须洁净干燥

a. 制胶框垂直放置在水平桌面上，打开压力凸轮卡锁， 卡锁面向前 

b. 选择垫片厚度合适的长玻板，将短玻板放于其上（图3a）

c. 抬起长玻板使标记为 "up"，将2块玻板轻轻滑入制胶框，短玻璃板冲前（凸轮卡锁侧）

（图3b）注:保证2块玻板底部齐平，长玻板上的标记导向正确。若玻板装配不正确或方向错误，可 能会发生漏胶。

  d.  锁紧凸轮卡锁，夹紧玻璃板夹心，做成灌胶模块（图3c）。注意玻板底部要齐平

  e.  将锁紧的制胶框放入灌胶架中（凸轮卡锁冲外），位于封胶垫上，用灌胶架的弹性架子

夹住长玻板（图3d）

注: 灰色的封胶垫要保持洁净

f. 若有其它胶，重复步骤a-e

图3. 安装PES - 5小型垂直电泳槽制胶框和灌胶

  2. 灌胶

a. 不连续聚丙烯酰胺胶

i. 将电泳梳子完全嵌入安装好的胶盒中。在梳齿下方1cm处做标记，此为灌注的分离胶的位置，取下梳子

ii.制备分离胶单体溶液（不加AP及TEMED） (参见第4章制胶公式 )，真空除气泡约15min

iii.  在处理后的胶液中加入AP及TEMED，用玻管或一次性塑料吸管缓缓加入制胶框中至标记处，注意不要产生气泡

iv.立刻用水或异戊乙醇覆盖

注：若使用水封胶，应缓慢平稳的加入，以免与胶液混合。不要使用丁醇或异丁醇覆盖

v.胶聚合45-60min。用蒸馏水冲洗胶表面。应避免长时间用乙醇封胶以免胶顶部脱水 注：可用下述方法室温过夜储存分离胶。加5ml 1：4稀释的1.5 M Tris-HCl, pH 8.8 buffer(for Laemmli system)封胶 。如果使用其它的缓冲体系，可加5ml 1x分离胶缓冲液来储存

vi.制备浓缩胶溶液（不加AP及TEMED）真空除气泡约15min

vii. 用滤纸将分离胶顶部水洗干

viii. 在处理后的胶液中加入AP及TEMED，用玻管或一次性塑料吸管缓缓加入制胶框中至短 玻板顶端，注意不要产生气泡

ix.迅速在玻板中间插入合适的电泳梳。注意梳子两端位于垫片之间，梳脊与短板顶端齐平

x. 浓缩胶聚合30-45min

xi. 小心移出电泳梳，用蒸馏水或电泳缓冲液冲洗梳孔

xii. 用毕，用去离子水或蒸馏水冲洗灌胶架和制胶框

b. 连续聚丙烯酰胺胶

i. 制备胶单体溶液（不加AP及TEMED） (参见第4章制胶公式 )，真空除气泡约15min

ii. 在处理后的胶液中加入AP及TEMED，用玻管或一次性塑料吸管缓缓加入玻板间至短玻板 顶端，注意不要产生气泡

iii.将合适的电泳梳插入玻板中间。注意梳子两端位于垫片之间，梳脊与短板顶端齐平

iv. 胶聚合45-60min

v. 小心移出电泳梳，用蒸馏水或电泳缓冲液冲洗梳孔

vi. 用毕，用去离子水或蒸馏水冲洗灌胶架和制胶框

第三部分 电泳芯安装与上样

1. 安装

注：当只运行2块胶时，使用电泳芯（带香蕉插头），不要使用辅助电泳芯（不带香蕉插头）； 当跑4块胶时，电泳芯和辅助电泳芯都要使用

a. 在干净的平面上打开制胶框（图4a） b.把三明治胶放入胶架，短玻璃板面冲里。胶架位于夹胶架底部，每侧有一个。注意三明治 胶与夹角架保持30°倾角。轻轻放入第一块胶，注意保持夹胶架平衡，不要过度倾斜。 然 后在夹胶架另一侧放入第二块胶。此时夹胶架的每一侧都有一块胶，2胶同时保持一定的倾 角(图4b)

Note: 注意将胶盒放入夹胶架中，并且短板冲里。这样，夹胶架和2块胶共同组成了电泳芯。 如果要跑奇数的胶（1或3），那么必须使用挡板和胶、夹胶架共同组成电泳芯 (图4b)

c. 将2块三明治胶板轻轻的推在一起，保证胶板四个角都稳固的靠在夹胶架上的绿色垫条上， 保证短板顶部位于绿色垫条顶部凹槽的下方

d. 用一只手轻轻的把三明治胶和绿色垫条挤在一起（要保持胶压力均匀并且不要移位）， 合上夹胶架的绿色架子。或者, 也可以双手抬起整个夹胶架系统，保证胶不要移动，同时合 上夹胶架的绿色架子 (图4c) 夹胶架的绿色架子将三明治胶的短板与垫条密封，再此确认短板位于垫条顶部凹槽的下方 . 在此处，加样孔被缓冲液冲洗，并上样(图4d)

e.将电泳芯放入Di PES - 5小型垂直电泳槽内 (图4e)

 Note:如果跑3-4块胶，用辅助电泳芯.重复步骤1a–e

图4. 安装 PES - 5小型垂直电泳槽电泳芯.

2. 将电泳芯放入PES - 5小型槽

PES - 5小型垂直电泳槽有2个放电泳装置的位置：电泳芯位于后面

辅助电泳芯位于后面

a.  将电泳槽放在一个平面上，面朝前（前面有2胶和4胶的标记）；若方向正确，电泳槽内

部顶端的红色标记应位于你的右边，而黑色标记位于左边

b.  如果只跑2块胶，你应使用电泳芯装置，因此，将电泳芯放在电泳槽后方的位置，注意红

色的电极插孔(+)要对应电泳槽内部顶端的红色标记 c.如果跑4块胶，将电泳芯放在后面，辅助电泳芯（无香蕉插头） 放在前面注意每个电泳装 置的红色的电极插孔(+)要对应电泳槽内部顶端的红色标记。不正确的装配会导致电泳槽盖 盖不上

3. 上样

a. 在电泳芯位于电泳槽外时加样，将电泳芯放在平面上

b.使用Hamilton注射器或移液器加样

c.如果使用上样器，可将其放在电泳芯2块胶的中间，可适合9、10、12、15 孔的上样

d.用Hamilton注射器或移液器从上样器的狭槽处注入样品，并上满相应的加样孔

Note:    注意：缓慢加样，使样品平稳的流入梳孔底部。注意注射器针头或移液器头不要戳破 梳孔底部。加样后，将电泳装置放入电泳槽内适当的位置

4.PES - 5小型电泳槽安装

a. 盖上盖子。注意香蕉插头的颜色和插孔一致， 盖子上插孔与电泳芯的香蕉插头可防止不 正确的装配。注意电泳槽侧边的突起要与盖子上对应的狭缝嵌合。轻轻的均匀用力，使盖子 和电泳槽嵌合紧密

第四部分 电压状况

a. 插入电源线，注意电极方向

b. 打开电源开始电泳，SDS-PAGE 和多数天然凝胶电泳推荐使用200 V 恒压，时间约为 35min*

* 电泳时间按胶浓度不同，约为35-45min（Tris-HCl系统）

第五部分 Gel 移除

a. 电泳完成后，关闭电源，拔出电极线

b. 打开电泳槽盖，小心取出电泳芯，倒掉缓冲液 Note: 请在打开电泳芯前倒掉缓冲液，避免溅洒 c. 打开电泳芯夹子，取出胶合

d. 小心的打开2块玻璃板

e. 反转玻板和胶，使胶漂在固定液或转移液上，轻轻晃动，使胶与玻板脱离

f. 使用后用蒸馏水冲洗电泳槽、盖子、电泳芯、辅助电泳芯、灌胶架、制胶框等

第六部分 日常维护

PES - 5小型电泳槽、盖子、电泳芯、辅助电泳芯、灌胶架、制胶框：每次使用后 用蒸馏水冲洗干净 玻璃板及电泳梳：用实验室去污剂洗涤，蒸馏水彻底冲洗，将长玻板在强碱性溶液中（如> 100 mM NaOH）浸泡，不要超过24hrs。硫酸三铬洗液浸泡2-3hrs。因避免长时间浸泡，以免损坏 封边垫条的粘合性

第七部分 疑难解答

*聚丙烯酰胺凝胶按下列2种方式分类 :

1) 总单体浓度 (%T)

2) 聚合单体浓度(%C).

g acrylamide + g bis-acrylamide x 100%

Total volume

g bis-acrylamide x 100%

g acrylamide + g bis-acrylamide